【直播回顾】CRISPR激活文库实验及应用

1月26日15:00，艾迪基因首席科学家张旭博士开展了主题为[CRISPR激活文库实验及应用]线上课程，详细介绍了CRISPR文库筛选原理以及CRISPR激活文库的应用。在最后答疑阶段，老师们踊跃提问，并且得到了满意的解答，接下来，让我们来回顾一下本次直播的精彩问答~

精彩问答

Q：测序文库的覆盖率低怎么办？

A：看您是质粒文库还是筛选完的文库，如果是质粒文库，可能是质粒文库的质量很差导致的覆盖率低；如果是阳性筛选完的文库覆盖率低是正常的，因为阳性筛选完已经杀死了很多细胞，sgrna少是正常的；如果是阴性筛选完的文库覆盖率低，可能是因为实验过程中的误差比较大。

Q：经过编辑的细胞都是有抗生素抗性是吗？

A：我们构建稳转株的时候，细胞都是有抗性的，但也可以用流式的方式，在cas后面加gfp，通过流式分选的方式解决，

Q：dcas9稳定株需要挑选单克隆吗？

A：我们一般用细胞池，激活文库如果是用转座子的方式一般使用细胞池。

Q：文库筛选需要考虑脱靶的问题吗？

A：因为现在文库已经发展得比较成熟，所以现在脱靶不是一个大问题。

Q：pb转座子是敲除还是敲入？

A：Pb转座子主要是为了把CAS、VP64和MCP这些蛋白随机整合到基因组上面去，所以算是敲入。

以上是这次直播课部分问答，更多精彩内容可在B站：广州艾迪基因，查看本次直播回放>>

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